DNA의 분리(II)
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작성일 22-10-29 06:05
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5. 용액 2를 2xxxxxx ml 첨가하고 뚜껑을 막은 후 시험관을 천천히 5회 정도 뒤집었다 세웠다를 반복하여 혼합한 뒤 5분간 상온에 둔다.
3. 상층의 배양액을 완전히 제거하고 남은 균용액을 다시 넣어서 침전시킨다. 그러나 앞의 것이 더 깨끗한 DNA를 얻을 수 있는 것 같다.
4. 박테리아 침전물에 용액 1을 2xxxxxx ml 넣고 진탕하여 부유시킨다. 이때 절대로 진탕과 같이 거친 방법으로 혼합해서는 안된다
u 용액 2를 첨가하면 세포가 용해되므로 sample이 맑아지고 점도가 높아지는 것을 observation할 수 있다아 이 과정에서 심하게 vortex하면 염색체 DNA가 깨져 나중에 섞여서 분리되게 된다
u 만약 5분이 지나도 용액이 혼탁하면 과정 4에서 진탕을 제대로 하지 않았거나 용액의 양…(drop)
1. Ampicillin이 60 ml/ml로 첨가된 LB 또는 TB 배양액 3 ml에 박테리아의 colony를 접종하여 37°C 배양기에서 하룻... , DNA의 분리(II)공학기술레포트 ,
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1. Ampicillin이 60 ml/ml로 첨가된 LB 또는 TB 배양액 3 ml에 박테리아의 colony를 접종하여 37°C 배양기에서 하룻...
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다. 實驗자에 따라서 용액 1에 RNase A를 2xxxxxx mg/ml 농도로 첨가해서 사용하기도 하지만, 이보다는 과정 10에서 RNase 처리를 해주는 것이 더 좋다.
u TB(terrific broth)를 쓰면 보다 짧은 시간 내에 더 많은 균을 얻을 수 있다아 Colony의 접종은 loop를 이용하는 것이 원칙이나 이쑤시개를 이용하면 더 간편하게 빨리 할 수 있다아
2. 미세원침관에 빅테리아가 완전히 자란 배양액을 1.5 ml 담고 15,xxxxxx0 rpm으로 1분간 원심분리하여 박테리아를 침전시킨다.
u 완전히 부유시키지 못하면 효율이 대단히 줄어든다. 원침관의 바닥에 남아있는 균이 없도록 철저히 진탕할 것.
u 용액 1, 2, 3의 양은 균의 양에 따라서 달라질 수 있다아 즉 균이 많으면 3xxxxxx-xxxxxxx-xxxxxxx ml를 쓰면 된다 다만 용액들의 비율을 1:1:1로 쓰면 되는데, 때로는 이 비율을 1:2:1.5로 쓰기도 한다.
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1. Ampicillin이 60 ml/ml로 첨가된 LB 또는 TB 배양액 3 ml에 박테리아의 colony를 접종하여 37°C 배양기에서 하룻밤동안 흔들면서 키운다.
